解決方法 ：仔細檢查一下器皿的**情況，是否在高壓**時(shí)放氣時(shí)間足夠，壓力足夠！尤其是和儲存培養液接觸的移液管等物品，連續兩次污染的話(huà)有可能造成儲存液污染，一定要注意！下次使用前檢查一下培養液是否存在渾濁的現象！可在培養液中加相應的***處理，如四環(huán)素，慶大霉素，或者鏈霉素。
2. 霉菌 ：培養液是清亮的，倒置顯微鏡下無(wú)雜質(zhì)，37度孵箱培養2-3天，仍清亮，但出現絮狀雜質(zhì)，鏡下可見(jiàn)呈細絲狀的團狀漂浮物，可看到明顯的菌絲，細胞仍可生長(cháng)，但時(shí)間長(cháng)之后，細胞的活力狀態(tài)變差。
解決方法 ：用硫酸銅溶液擦拭CO?孵箱內，再把水盤(pán)里也加上飽和量的硫酸銅?；蛘咴谂囵B箱的托盤(pán)加入飽和的**磷酸氫二鈉高鹽液體,可以防止霉菌污染。
CO?孵箱被霉菌污染后，可把所有細胞暫時(shí)轉移，采用過(guò)氧乙酸擦洗孵箱（包括隔板，箱壁）。并把過(guò)氧乙酸放置在孵箱內一個(gè)小時(shí)，使其蒸汽彌漫。待過(guò)氧乙酸的氣味消散后，再移入細胞。孵箱應定期清潔（2月左右），尤其在多雨的季節。
其它培養箱清洗方法是：用84液擦洗－清水擦洗－75%酒精擦洗－紫外燈照。
預防霉菌污染，可在培養基里加3u/ml的兩性霉素或制霉菌素或放線(xiàn)菌素D或雙抗；但細胞一旦污染，很難挽救，制霉菌素或放線(xiàn)菌素D或雙抗都于事無(wú)補，建議舍棄該污染細胞。，將環(huán)境徹底**，如果所有細胞都污染，可能是系統污染，檢查一下培養基和器材，如果只是個(gè)別污染，可能是操作問(wèn)題，就要注意操作。
3. 支原體 ：黑色的，好象多為多形，培養液一般培養液一般會(huì )渾濁，原體感染，國內血清很多都沒(méi)有做支原體陰性檢測，而支原體是牛血清中*常見(jiàn)的微生物之一。而且它不能用過(guò)濾的辦法除去。支原體感染細胞以后，細胞病變不很明顯，只是慢慢死去。
解決方法 ：支原體污染細胞后，特別是重要的細胞株，有必要**支原體，常用方法有：***處理、抗血清處理、***加抗血清和補體聯(lián)合處理。要注意的是：支原體沒(méi)有細胞壁，故作用于細胞壁生物合成的***，如內酰胺類(lèi)、萬(wàn)古霉素等是不敏感的；對多粘菌素、利福平、磺胺**普遍耐火藥。對支原體*有抑制活性***是四環(huán)素類(lèi)、大環(huán)內酯類(lèi)等，氨基糖苷類(lèi)、氯霉素對支原體有較小的抑制作用。必要時(shí)更換所有培養用物。通常，濾過(guò)**的方法對支原體是沒(méi)有作用的。
4. 黑蛟蟲(chóng) ：可以穿透濾膜，也可以通過(guò)空氣傳播，低倍下為黑色點(diǎn)狀，高倍下可看見(jiàn)黑色的小蟲(chóng)游來(lái)游去，培養液也是不渾的，一般不會(huì )太影響，細胞還是可以用的。常常是細胞生長(cháng)狀態(tài)良好，且觀(guān)測到的運動(dòng)物無(wú)明顯增多，且培養液顏色、透明度無(wú)明顯變化，可在同一批號的血清養的細胞中發(fā)現類(lèi)似現象。
解決方法 ：對細胞生長(cháng)狀態(tài)不會(huì )有明顯影響，在細胞增殖旺盛之后會(huì )自然消失，除更換血清外無(wú)須特殊處理。建議如果細胞有可能是此種污染的話(huà)，可以增加細胞的種板密度，以提高細胞的生存率。
5. ** ：一般培養液清亮，不變色，鏡下有絲狀物，有些**開(kāi)始很像死細胞碎片，只是它很多很多的小塊很清楚，象珊瑚狀，不象細胞碎片分不清，慢慢的會(huì )長(cháng)出很細的黑色絲狀物。**生長(cháng)的比較慢，不象**那么容易被發(fā)現，但是一旦發(fā)現有它的存在細胞就被污染了，也很難救活了。
解決方法 ：果斷扔掉，然后徹底****培養間， CO?孵箱，器皿和培養液。
6. 原蟲(chóng) ：培養液可輕微渾濁，顯微鏡下那些細小的點(diǎn)狀物數量非常多，輕微活動(dòng)，細胞雖然可以生長(cháng)但繁殖速度卻明顯減慢，而且細胞狀態(tài)不好，邊緣不清楚，細胞不透亮。它們與細胞可共生但會(huì )與細胞爭奪營(yíng)養。這種共生是非常普遍的，但它們的數量小，細胞占優(yōu)勢所以不會(huì )影響到細胞的正常生長(cháng)，只有當它們到達一定的數量時(shí)就會(huì )影響到 細胞 的生長(cháng)，*終形成惡性循環(huán)。
解決方法 ： 污染的可能原因很多，比如配液**問(wèn)題、操作問(wèn)題、環(huán)境問(wèn)題等等，如果細胞很多的話(huà)，直接扔了重新復蘇細胞，如果是保種細胞的話(huà)，可購買(mǎi)相關(guān)的**試劑。
污染的可能原因：可能原因很多比如配液**問(wèn)題、操作問(wèn)題、環(huán)境問(wèn)題等等 。
關(guān)于培養基的無(wú)菌狀況，取培養基至培養瓶中（不加細胞），37度試培養一段時(shí)間后觀(guān)察。如果沒(méi)有**生長(cháng) 就是操作的問(wèn)題。
也可以在培養基中事先加入雙抗（硫酸鏈霉素和氨芐青霉素）。但雙抗有時(shí)會(huì )影響細胞的狀態(tài)，所以在做轉染、檢測細胞某項指標前一定要撤去雙抗，以避免影響實(shí)驗結果。
1、孵箱應定期用三氧機** 或者 紫外光照射，并用酒精和新潔爾滅試擦孵箱同時(shí)孵箱內的水應是三蒸水
2、超凈臺\取材\器材\培養液\培養瓶\操作等因素
3、超凈臺的風(fēng)機不能過(guò)大，風(fēng)機到6-8格。否則也可能能致霉菌污染
4、無(wú)菌室經(jīng)甲醛熏蒸**后，可用同等量的氨水噴灑中和，約幾小時(shí)即可進(jìn)入操作。
