1、購買(mǎi)的細胞死亡或存活率不佳可能原因？細胞冷凍管解凍后，為何會(huì )有細胞數目太少的情形？
研究人員在細胞培養時(shí)出現存活率不佳，常見(jiàn)原因可歸納為：培養基使用錯誤或培養基品質(zhì)不佳；血清使用錯誤或血清的品質(zhì)不佳；解凍過(guò)程錯誤；冷凍細胞解凍后，加以洗滌細胞和離心；懸浮細胞誤認為死細胞；培養溫度使用錯誤；細胞置于 –80 ℃ 太久。
研究人員在冷凍細胞培養時(shí)出現細胞數目太少，大都是因為離心過(guò)程操作上的失誤，造成細胞的物理性損傷，以及細胞流失。建議細胞解凍后不要立刻離心，應待細胞生長(cháng)隔夜后再更換培養基即可。
2、收到的冷凍管瓶身破裂，瓶蓋有裂紋，或瓶蓋脫落的原因？
冷凍管瓶蓋裂紋，或瓶身破裂，可能是因為操作者夾取冷凍管時(shí)用力不當，造成冷凍管裂損，建議使用止血鉗小心夾取。另冷凍管瓶蓋松動(dòng)或松脫，是因熱脹冷縮的物理現象，冷凍管有可能因此而造成細胞污染，故冷凍管于放入和取出液氮桶時(shí)，均應立刻將冷凍管再一次扭緊。
3、如何選用特殊細胞系培養基？
培養某一類(lèi)型細胞沒(méi)有固定的培養條件。在 MEM 中培養的細胞，很可能在 DMEM 或 M199 中同樣很容易生長(cháng)?？傊?，優(yōu)選 MEM 做粘附細胞培養，RPMI-1640 做懸浮細胞培養是一個(gè)好的開(kāi)始，各種目的無(wú)血清培養*好優(yōu)選 AIM V（12005）培養基（SFM）。
4、L-谷氨酰胺在細胞培養中重要嗎？它在溶液中不穩定嗎？
L-谷氨酰胺在細胞培養時(shí)是重要的。脫掉氨基后，L-谷氨酰胺可作為培養細胞的能量來(lái)源、參與蛋白質(zhì)的合成和核酸代謝。L-谷氨酰胺在溶液中經(jīng)過(guò)一段時(shí)間后會(huì )降解，但是確切的降解率一直沒(méi)有*終定論。L-谷氨酰胺的降解導致氨的形成，而氨對于一些細胞具有毒性。
5、GlutaMAX-I 是什么？培養細胞如何利用 GlutaMAX-I？這個(gè)二肽有多穩定？
GlutaMAX-I 二肽是一個(gè) L-谷氨酰胺的衍生物，其不穩定的 alpha-氨基用 L-丙氨酸來(lái)保護。一種肽酶逐漸裂解二肽，釋放 L-谷氨酰胺供利用。GlutaMAX-I 二肽非常穩定，即使在 121 磅** 20 分鐘，GlutaMAX-I 二肽溶液有*小的降解，如果在相同條件下，L-谷氨酰胺幾乎完全降解。
6、什么培養基中可以省去加酚紅？培養基中丙酮酸鈉的作用是什么？
酚紅在培養基中被用來(lái)作為 PH 值的指示劑：中性時(shí)為紅色，酸性時(shí)為黃色，堿性時(shí)為紫色。研究表明，酚紅可以模擬固醇類(lèi)**的作用（特別是雌**）。為避免固醇類(lèi)反應，培養細胞，尤其是哺乳類(lèi)細胞時(shí)，用不加酚紅的培養基。由于酚紅干擾檢測，一些研究人員在做流式細胞檢測時(shí)，不使用加有酚紅的培養基。
丙酮酸鈉可以作為細胞培養中的替代碳源，盡管細胞更傾向于以葡萄糖作為碳源，但是，如果沒(méi)有葡萄糖的話(huà)，細胞也可以代謝丙酮酸鈉。
7、為什么目錄上說(shuō) Hank's 平衡鹽溶液 （HBS） 在空氣中使用，不需要 CO2 培養箱？HBS 和 Earle's 平衡鹽溶液 （EBS） 有什么本質(zhì)的功能差別？
HBS 和 EBS 的主要差別在于碳酸氫鈉的水平，在 Eagles （2.2 g/L） 中比在 Hanks （0.35 g/L） 中高。碳酸氫鈉需用高水平的 CO2 平衡，以維持溶液的 PH 值。Eagles 液在空氣水平的 CO2 中，溶液會(huì )變堿，Hanks 液在 CO2 培養箱中會(huì )變酸。如果希望在 CO2 培養箱中保存組織，需要用 Eagles 液，如果僅僅是清洗將要在細胞培養基中儲存的組織，用 Hanks 液就可以了。
8、二價(jià)離子抑制胰蛋白酶活性嗎？使用胰蛋白酶時(shí)加入 EDTA 的目的是什么？
二價(jià)離子的確抑制胰蛋白酶活性。EDTA 用來(lái)螯合游離的鎂離子和鈣離子，以便保持抑制胰蛋白酶的活性。建議胰蛋白酶處理細胞前，用 EDTA 清洗細胞，以消除來(lái)自培養基中所有的二價(jià)離子。
9、其他注意事項
o 當在無(wú)血清培養基中添加***時(shí)，降低至少在有血清培養基中所使用濃度的 50%。血清蛋白會(huì )結合和滅活一些***。在無(wú)血清培養條件下，***不被滅活，可能對于細胞達到毒性水平。
o 一旦您在新鮮培養基中添加了血清和***時(shí)，您應該在兩到三周內使用它。因為一些***和血清中的基本成分在解凍后就開(kāi)始降解。
o 大部分添加物和試劑*多可以?xún)鋈?3 次，如果次數更多都會(huì )在包含蛋白的溶液引起一定水平的降解和沉淀，將會(huì )影響它的性能。
o 在溶解的一周內使用貯存在 4℃ 冰箱中的液體胰蛋白酶溶液。胰蛋白酶在 4℃ 就可能開(kāi)始降解，如果在室溫下放置超過(guò) 30 分鐘，就會(huì )變得不穩定。
o 為了保持 CO2 培養箱水盤(pán)清潔，需定期 （至少每?jì)芍芤淮危?用無(wú)菌蒸餾水或無(wú)菌去離子水更換。
